Súlyos hibák pestis DNS -eszköz, amely a biológiában lévő munkaállat.

Laboratórium -gyártású plazmid, a modern biológiában működő munka ló problémái vannak. A kutatók a kör alakú DNS -struktúrák szisztematikus értékelését végezték el több mint 2500 plazmid elemzésével, amelyeket laboratóriumokban gyártottak és elküldtek egy olyan társaságnak, amely olyan szolgáltatásokat kínál, mint például a vírusokon belüli struktúrák csomagolása, hogy génterápiaként felhasználhassák őket. A csoport megállapította, hogy a plazmid -tervezési hibák csaknem fele volt, beleértve a szekvenciák hibáit, amelyek döntő jelentőségűek a terápiás gén expressziójához. A kutatók a múlt hónapban tették közzé eredményeiket a Biorxiv 1 click click"> 1 click click "> 1 click to.

A tanulmány felfedi a plazmidok laboratóriumban való megvalósításáról szóló "ismeretek hiányát" - mondja Hiroyuki Nakai, az oregoni Health & Science University genetikus, aki nem vett részt a munkában. Már észrevette a laboratóriumi plazmidokkal kapcsolatos problémákat, de meglepte a tanulmány által felsorolt ​​hibák gyakorisága. Valószínűleg sok tudományos mű közzétett, amelyekre az eredmények nem reprodukálhatók a plazmid -tervezés hibái miatt - tette hozzá.

pazarolt idő

plazmid népszerű eszközök a biológiai laboratóriumokban, mivel a baktériumok, beleértve a széles körben elterjedt modell -szervezetet escherichia coli , a gének tárolására és cseréjére történő struktúrákat használják. Ez azt jelenti, hogy a biológusok olyan designer plazmidot tudnak előállítani, amely különféle érdekes géneket tartalmaz, majd e. Coli meggyőzheti őket, hogy rögzítsék őket, és sok példányt készítsenek róla.

Bruce Lahn, az illinoisi Chicagóban székhellyel rendelkező VectorBuilder fõ tudósa biztosítja a génszállítási eszközöket, azt mondja, hogy ő és más biológusok évek óta észrevették a plazmid minőségének problémáit. Amikor Lahn a Chicagói Egyetem professzora volt, egy doktori hallgató hat hónapot töltött laboratóriumában két plazmid reprodukálására, amelyekről a tudományos irodalomban beszámoltak. "Nem gondoltunk a plazmid minőségére, de a kísérlet nem működött", mert a plazmidhibák tartalmaztak.

A VectorBuildernél Lahn azt mondja, hogy folyamatosan szembesül a problémával - ezért úgy döntött, hogy szisztematikusan értékeli azt. Amikor az ügyfelek hibás plazmidot nyújtanak be, "sok időt pazarolnak", és a minőség -ellenőrzés további lépései növelik a plazmid előállításának és a vírusok csomagolásának költségeit - mondja.

A VectorBuilder csapat elemzése smorgasbordot eredményezett a több mint 2500 névleges plazmidban. Néhány olyan génet tartalmazott, amelyek a fehérjéket kódolták, amelyek e esetén. A coli mérgező volt, ami azt jelenti, hogy lelassíthatják vagy megállíthatják a szervezetek növekedését a biológusok számára, hogy megismételjék plazmidjukat. Mások, akiket a vírusok által kódolt fehérjék csomagolására szántak, amelyek mérgezőek voltak ezeknek a vírusoknak. És néhányan olyan ismétlődő DNS -szekvenciákat tartalmaztak, amelyek felhalmozódhatnak a plazmid mutációkban.

A hibák áttekintése

A leggyakoribb hibák, amelyeket Lahn és kollégái találtak, csatlakoztak a génterápia kulcsszerepéhez. A terápiákat gyakran az adeno-asszociált vírusokba (AAV-k) csomagolják, amelyek nagyrészt ártalmatlanok és képesek kezelni a kezeléseket a sejtekbe. Amikor a plazmidot előállítják ezeknek az AAV -k szendvicskutatóknak, egy terápiás gén az ITR -knek nevezett szekvenciák között, és döntő szerepet játszik annak biztosításában, hogy a gén a vírusba kerüljön a szüléshez. Ezek a szekvenciák lényegében a sejtek biológiai jelét küldik, amely azt mondja: "Én tartozom ehhez a vírushoz". A csoport azonban úgy találta, hogy a vizsgálatban szereplő AAV plazmidok kb. 40% -ának mutációi vannak az ITR régiókban, amelyek hamisíthatják ezt a fontos üzenetet. Ha a kutatók ezt a helytelenül megtervezett plazmidot használják, génterápiájuk nem működhet, és hosszú időbe telik, amíg a tudósok megtudják, miért.

Mark Kay, a kaliforniai Stanfordi Orvostudományi Iskola gyermekgyógyászati ​​és genetikájának szakembere is először látta, hogy a plazmid hibák késleltethetik a laboratóriumi projekteket. Biztos azonban abban, hogy a tudósok felismerhetik és kijavíthatják ezeket a hibákat. Azt mondja, hogy a génterápiás kutatók tudják az esetleges ITR -problémákat, és hogy a klinikai környezetben bekövetkező hibák nem valószínű. Ennek oka az, hogy a szabályozó hatóságok, például az Egyesült Államok Élelmezési és Gyógyszerügynökségének szigorú szabványai vannak, a kutatók arra kötelezik, hogy gondosan elemezzék plazmidjukat, mielőtt a klinikán használják őket.

Nakai szerint a szekvenálással történő plazmidok áttekintése a kutatók tudomására juthat a tanulmányban hangsúlyozott problémákkal. Egyes vállalatok, köztük a plazmidsaurus Eugene, Oregon és az Elim Biopharmaceuticals a kaliforniai Hayward -ban, mintánként körülbelül 15,00 dollár plazmid -szekvenálást kínálnak - mondja Nakai, aki mindkét társaságban nincs pénzügyi érdeke. Azt is javasolja, hogy az új laboratóriumi munkavállalók időt töltsenek a tapasztalt plazmid -tervezőktől; Ez egy unalmas, kézi folyamat, mondja, de ha hibát követ el, óriási időt és pénzt pazarolhat.

A laboratóriumok számára a problémák elkerülése más módja az, ha a plazmid-szekvenciákat nyilvánosan elérhetővé teszi a nyílt hozzáférésű tárolókban-mondta Melina Fan, az Addgenene nonprofit szervezet tudományos vezérigazgatója, a Massachusetts-i Watertowne-ban. Az Addgene ilyen tárolóval rendelkezik, mondja a rajongók és "szekvenciák a tárolt plazmidot, és a szekvenciaadatokat a weboldalon keresztül kommunikálja a közösség számára". Fontos a plazmidok ellenőrzése.

lahn reméli, hogy csapata elemzése a kutatók figyelmét arra irányítja, hogy ezeket a munkaállati laboratóriumi eszközöket gyakran magától értetődőnek tekintik. "A szerszám egészsége olyasmi, amire az emberek nem gondolkodnak" - mondja, bár nekik kellene.